肺类器官重复照射与吡非尼酮转录指标测试
在 H9 来源肺类器官中重复 γ 射线照射，比较吡非尼酮对纤维化相关 mRNA 的影响。
用途与模型
- 研究用途
- 研究人源肺上皮放射损伤和短期抗纤维化药物作用。
- 模型与细胞来源
- H9 胚胎干细胞来源肺类器官；研究实验采用第 3–8 代，包含肺泡及气道上皮标志。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- Matrigel 三维培养、48 孔板、137Cs γ 射线照射和定量 PCR。
材料与平台
- 分化与三维培养
- 主文方法先诱导内胚层 6 天、前肠 4 天、腹侧前肠 4 天及肺前体 7 天；第 21 天以每孔 2×10^5 个细胞在 U 底超低吸附 96 孔板聚集 2 天。随后用 hLuN 培养液与 Matrigel 1:1 配成 20 μL 基质滴，置 48 孔板，加 200 μL 培养液及 10 μM Y-27632。
- 照射与给药
- 主要药物图 7 在第 1 天与第 4 天分别给予 4 Gy，每次照射后立即加入 0.5 mg/mL 吡非尼酮，第 5 天取 RNA。对照包括未照射和照射后 PBS 处理。
- RNA 与检测
- TRIzol 提取 RNA，3 μg 总 RNA 逆转录；StepOne 实时 PCR 系统测 TGF-β、α-SMA 及 COL1A2，按 GAPDH 归一化。PCR 反应设 3 个重复，原文统计部分说明至少 3 次独立实验。
测量指标与分析
- TGF-β、α-SMA、COL1A2 相对 mRNA 表达
- Ki-67 阳性细胞数
- 胶原及上皮连接蛋白染色
药物作用以图 7 的照射日程及 RNA 终点比较；上皮表型另由免疫染色、蛋白检测及单细胞测序描述。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 重复照射后加吡非尼酮，与照射/PBS 模型比较。
- 测试范围
- H9 来源类器官；药物图 n=3，统计部分为至少 3 次独立实验。
- 参照体系
- 未照射基线、照射后 PBS 及吡非尼酮条件。
- 研究结果
- 吡非尼酮组 TGF-β、α-SMA 及 COL1A2 的 mRNA 降低。
适用条件与研究局限
- 培养体系未加入巨噬细胞等免疫成分。
- 方法和免疫染色章节将第二次照射记为第 3 天，药物图 7 则记为第 4 天；两处日程不同。
- 药物验证采用单个浓度及短期转录指标。
来源与原文
- A human lung organoid platform for studying radiation-induced pulmonary fibrosis and antifibrotic drug screening原始研究 · Scientific Reports · 2025-12-29