肺癌与正常支气管类器官的 6 天浓度—反应测试
以基因注释肺癌类器官及正常支气管模型比较药物反应。
用途与模型
- 研究用途
- 研究不同基因背景的靶向药敏感性，并取得正常支气管模型的并行反应参照。
- 模型与细胞来源
- 80 个库内肺癌类器官，5 类病理亚型；药物实验使用代表性 BRCA2、EGFR、MET 背景模型和正常支气管类器官。
- 方法版本
- 原研究首次正式发表版本
- 实验形式
- Matrigel 培养；96 孔白板进行药筛。
材料与平台
- 组织检查与培养
- 手术组织消化后先以 H&E 检查上皮样细胞比例；DMEM/F12 补 bFGF 20 ng/mL、EGF 50 ng/mL、N2、B27 与 ROCK 抑制剂 10 µM。正常模型另加 30% Wnt3a 条件液、Noggin 100 ng/mL、A83-01 500 nM。
- 药筛接种
- 已培养超过 2 周的类器官用 TrypLE 解离，MBM/Matrigel 1:3 混合，96 孔白板每孔 10 µL、约 2,000 个细胞；成胶后加 100 µL 培养液，继续生长 10–14 天。
- 药物与检测
- 多西他赛、奥拉帕利、厄洛替尼与克唑替尼各 10 个浓度，每 3 天补药，6 天后测 CellTiter-Glo ATP 信号；DMSO 对照、每个条件 3 个重复。
测量指标与分析
- 相对 ATP 活力
- IC50
- MET 拷贝数与 c-Met 表达
- 信号蛋白磷酸化
拟合各模型浓度—反应曲线；比较相同 EGFR 变异但 MET 状态不同的模型，辅以正常支气管模型和移植瘤药物结果。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 基因注释肿瘤模型接受不同靶向药，并与正常支气管模型平行比较。
- 测试范围
- 代表性 LCO-28、LCO-55、LCO-43、LCO-51 及正常支气管类器官；各条件 3 个重复。
- 参照体系
- DMSO 及正常模型；相同 EGFR 背景而 MET 状态不同的肿瘤模型。
- 研究结果
- BRCA2 变异不同的模型对奥拉帕利反应不同；EGFR p.L858R/MET 扩增的 LCO-51 厄洛替尼不敏感、克唑替尼有作用。
适用条件与研究局限
- BRCA2 变异功能仅有预测与药敏对应，作者提出仍需功能验证。
- 模型缺少完整免疫和间质细胞环境。
- 正常支气管的活力测试只覆盖本实验组织和条件。
- 药物实验未形成接受相应用药的患者临床验证队列。
来源与原文
- Patient-derived lung cancer organoids as in vitro cancer models for therapeutic screening原始研究 · Nature Communications · 2019-09-05