KRAS-G12C 肺癌类器官的 SRC 联合药效测试
在 2 个 KRAS-G12C 肺腺癌类器官系中比较 MRTX849 与 SRC 抑制剂单药及联合后的 7 天活力。
用途与模型
- 研究用途
- 研究 KRAS-G12C 给药后信号恢复与候选联合用药作用。
- 模型与细胞来源
- HCC4300-PDX-ORG 及 HCC4285-PDX-ORG，均对应未经治疗肺腺癌患者；在生长因子减少型 Matrigel 中培养。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- 三维基质培养、7 天药物矩阵、细胞计数试剂盒 8（Cell Counting Kit-8，CCK-8）及免疫印迹。
材料与平台
- 模型与培养材料
- 培养液基于 Advanced DMEM/F12，含 B27、N2、EGF、FGF10、FGF7、R-spondin3、noggin、A83-01 和 Y-27632 等。
- 药物条件
- 图 9 在 HCC4300 中比较 MRTX849 为 0、10、100、1000 nM，达沙替尼、DGY-06-116 或 bosutinib 为 10、100、1000 nM 的单药及组合；处理 7 天。HCC4285 另比较 MRTX849 的 100 或 1000 nM 条件与各 SRC 抑制剂组合。
- 信号与活力
- HCC4300 用 1 µM MRTX849 比较第 1 天和第 7 天蛋白。CCK-8 检测方法加入 100 µL 新鲜培养液及 10 µL 试剂，37 °C 孵育 2 小时，在 450 nm 测吸光度；明场成像记录形态。
- 联合分析
- 使用 SynergyFinder 计算 ZIP 协同评分，并对单药、组合及溶剂对照比较；图 9 报告 3 个生物学独立样本，蛋白图为 3 次重复的代表。
测量指标与分析
- CCK-8 相对活力
- 组合 ZIP 协同评分
- SRC/JUN/ABCC1 与 ERK 蛋白变化
- 类器官明场形态
7 天模型药效与第 1/7 天信号分别分析；图 9 多组比较采用双因素 ANOVA。CCK-8 以 450 nm 吸光度表征相对代谢活力。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 2 个 KRAS-G12C 肺腺癌类器官系接受 MRTX849 及 SRC 抑制剂单药或联合。
- 测试范围
- HCC4300 与 HCC4285，图 9 为 3 个生物学独立样本。
- 参照体系
- 溶剂、MRTX849 单药及各 SRC 抑制剂单药。
- 研究结果
- 联合后 CCK-8 活力降低，HCC4300 三种组合 ZIP 评分约 27.3、24.3、20.7。
适用条件与研究局限
- 类器官验证限于 2 个系，未与实际患者治疗反应进行盲法比较。
- CCK-8 活力和 7 天蛋白指标为主要验证。
- 各 SRC 抑制剂的药理范围不同。
来源与原文
- SRC kinase drives multidrug resistance induced by KRAS-G12C inhibition原始研究 · Science Advances · 2024-12-11