Wnt 报告细胞的重复暴露与实时发光检测
用活细胞荧光素酶信号连续观察 Wnt/β-catenin 通路，比较持续给药和重复给药、撤药安排。
用途与模型
- 研究用途
- 分析药物反应的升高、回落、延迟和再次诱导，比较不同化合物及暴露时序。
- 模型与细胞来源
- 人 HEK293 STF 报告细胞，以萤火虫荧光素酶反映 Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路信号。
- 方法版本
- 2022 年 HEK293 STF 灌流报告细胞系统
- 实验形式
- 微流控灌流培养与非裂解实时发光成像，持续观察同一培养体系。
材料与平台
- 培养与测量
- 37 °C 控温发光成像设备；MEM 加 10 mM HEPES，在无外部二氧化碳条件下维持培养。
- 持续处理
- 连续灌流 6 天，氯化锂 2、5、10 mM；E738 0.1、0.5、1 μM；培养液包含荧光素酶底物。
- 重复处理
- 每轮 6 小时给药后 18 小时无药灌流，或 6 小时无药后 18 小时给药；使用氯化锂 10 mM 或 E738 1 μM。
- 灌流切换与参照
- 切换条件时为 50 μL/h，随后降到 20 μL/h；氯化锂设无药参照，E738 设 0.01% DMSO 参照。
测量指标与分析
- 荧光素酶发光相对参照的变化
- 信号出现与峰值时间
- 撤药后的信号持续时间
- 重复给药后的再次反应
连续记录每种处理的发光曲线，比较浓度和时序对信号的影响。分开记录实际暴露阶段和撤药后阶段，以观察反应滞后。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 两种化合物的连续浓度比较，以及两类重复给药—撤药循环。
- 测试范围
- HEK293 STF 单一报告细胞体系；连续灌流观察 6 天，重复处理采用 24 小时循环。
- 参照体系
- 无药或 DMSO 参照，不同药物浓度与 6 小时/18 小时给药安排。
- 研究结果
- 10 mM 氯化锂约 26 小时达到较高信号，持续处理后逐渐回落；E738 信号更持久，短时处理的峰值可在撤药后出现，再次给药仍能诱导反应。
适用条件与研究局限
- 发光反映报告通路反应，未直接测定细胞内药物浓度或清除速率。
- 只验证一种报告体系与两种调节化合物；较弱报告信号可能需要更灵敏检测。
- E738 重复处理的图注及前段写 1 μM，同节后段写 1 mM，浓度记载存在差异。
来源与原文
- Real-time monitoring of immediate drug response and adaptation upon repeated treatment in a microfluidic chip system原始研究 · Archives of Toxicology · 2022-03-19