H9 脑类器官的七氟烷暴露与标记核分布
在第 30 天类器官中气相七氟烷暴露 6 小时，统计 Pax6 阳性区域内 BrdU 标记核的位置。
用途与模型
- 研究用途
- 研究吸入麻醉药对早期神经前体区域的短期影响。
- 模型与细胞来源
- H9 胚胎干细胞来源第 30 天脑类器官，具有 Pax6 阳性脑室样区域。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- 三维类器官、气相暴露及 BrdU/Pax6 组织染色分区统计。
材料与平台
- 模型培养
- 每孔 9,000 个 H9 细胞，以 150 μL mTeSR 加 1×RevitaCell 起始，第 3 天去补充物；第 5 天转神经诱导液，隔天换液 6 天，Matrigel 包埋后先不加维生素 A，5 天后加入并旋转培养至第 30 天。
- 药物条件
- 随机分组，七氟烷气相 4.1%，37 °C、5% CO2 中暴露 6 小时；对照相同温度和 CO2、不加七氟烷。
- 标记与统计
- 第 30 天模型在处理前进行 BrdU 脉冲标记，处理后染 Pax6 及 BrdU；将 Pax6 阳性脑室样区域分为 5 个区段，按顶端到基底侧统计 BrdU 阳性核百分比。
测量指标与分析
- 5 个区段的 BrdU 阳性核分布
- Pax6 阳性脑室样结构
图 3 为每组 n = 3，结果以均值及 SEM 报告；组别与分区采用双因素重复测量 ANOVA 及 Bonferroni 比较。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 短期七氟烷与无药条件比较核分布。
- 测试范围
- 第 30 天 H9 来源模型，图 3 每组 n = 3。
- 参照体系
- 无七氟烷的培养对照。
- 研究结果
- 七氟烷组标记核向基底侧的分布增加，与胎鼠方向相似。
适用条件与研究局限
- 人源部分为固定终点分布，未测连续核迁移轨迹。
- Notch 救援、出生后恢复及水迷宫验证来自小鼠。
- 体外气相百分比没有对应类器官内实测药物浓度。