结直肠癌类器官三元共培养的化疗反应
在患者来源类器官、匹配 CAF 和单核细胞的三维共培养中，评价化疗后的髓系细胞表型及细胞因子变化。
用途与模型
- 研究用途
- 研究肿瘤间质对髓系细胞及化疗免疫反应的影响。
- 模型与细胞来源
- 患者匹配的结直肠癌 PDO 与 CAF；主要使用健康志愿者单核细胞，另以结直肠癌患者血液细胞开展表型比较。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- Geltrex 三维共培养，流式表面标志与上清细胞因子检测。
材料与平台
- 模型组成与培养
- CAF、单核细胞和类器官细胞比例为 20:10:1，Geltrex 包埋培养 72 小时；比较基础培养液、CAF 条件培养液和 ENAS。省略某类细胞的对照保持培养总细胞数一致。
- 基础培养材料
- 基础培养液为 HEPES 缓冲 Advanced DMEM/F12，含 1×GlutaMAX 和 1% FBS；CAF 条件培养液由 3 天培养获得。
- 化疗比较
- 模型在基础培养液中接受 20 μM 奥沙利铂、0.5 mM 氟尿嘧啶或相应联合处理 24 小时，与未处理条件比较。
- 检测对象
- 流式细胞术检测 CD206、CD163、CD86、HLA-DR、PD-L1、SIRPα 及 4-1BBL；LEGENDplex 检测 IL-6、IL-1β、TNF 和 IL-10，使用 DxFlex 采集。
测量指标与分析
- 髓系细胞表面标志的荧光强度
- 上清细胞因子浓度
- 培养组成和培养液对药物反应的影响
各患者材料的流式表型和上清细胞因子在有无 CAF、不同培养液及化疗条件之间分别比较。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 先比较细胞组成及培养液，再在 4 名结直肠癌患者对应模型中评价 24 小时化疗后的表型与细胞因子。
- 测试范围
- 4 名患者对应的肿瘤材料；主要单核细胞来自健康志愿者，另有结直肠癌患者血液细胞验证。
- 参照体系
- 无 CAF、单核细胞单独培养、不同培养液以及未接受化疗的条件。
- 研究结果
- CAF 提高 CD206、CD163 等表面标志，化疗降低其中部分标志；细胞因子反应因患者而异。
适用条件与研究局限
- 髓系细胞仅部分分化为巨噬细胞，具有肿瘤相关巨噬细胞样特征。
- PDO 和 CAF 匹配患者，单核细胞并非全部来自同一患者。
- 培养液明显影响表型。
- 另行吞噬测试采用类器官 1 或 6 天预处理，再与免疫细胞共培养。
来源与原文
- Cancer-associated fibroblasts shape early myeloid cell response to chemotherapy-induced immunogenic signals in next generation tumor organoid cultures原始研究 · Journal for ImmunoTherapy of Cancer · 2024-11-04