宫颈癌类器官与自体 TIL 的 72 小时杀伤检测
配对患者类器官和肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes，TIL），比较肿瘤凋亡与免疫活化。
用途与模型
- 研究用途
- 评估患者特异 T 细胞的体外肿瘤杀伤差异，筛选肿瘤特异性细胞毒性 T 细胞。
- 模型与细胞来源
- 宫颈癌类器官库 67 个；实际自体 TIL 杀伤使用 7 对模型和患者淋巴细胞。
- 方法版本
- 原研究正式发表版本
- 实验形式
- Matrigel 肿瘤培养；扩增 TIL 后解除基质、进行自体共培养。
材料与平台
- 肿瘤培养
- 组织用 0.5 mg/mL collagenase II、10 µM Y-27632 在 37°C 消化 1–2 小时；Matrigel 滴在 24 孔板培养。鳞癌采用不含 R-spondin1/CHIR99021 的培养液，腺癌保留相应 Wnt 成分。
- TIL 扩增
- 小块自体肿瘤组织在 24 孔板用 X-Vivo15 培养液、IL-2 6,000 IU/mL 培养 2 周，再收集扩增的 TIL。
- 共培养与对照
- 共培养板先用 5 µg/mL 抗 CD28 在 4°C 包被 24 小时；按 TIL:靶细胞 10:1 培养 72 小时。MHC 阻断对照以 150 µg/mL 抗 HLA-ABC 与 30 µg/mL 抗 HLA-DR/DP/DQ 在 37°C 预处理模型 30 分钟。
- 杀伤与活化检测
- 类器官 Cell-Trace Far Red 标记，caspase-3/7 探针测凋亡；72 小时后显微成像并解离流式定量。上清 ELISA 测 IFN-γ，TIL 另测 CD3/CD4/CD8/CD137/CD107a。
测量指标与分析
- caspase-3/7 阳性凋亡定量
- 上清 IFN-γ 浓度
- TIL 中 CD137 与 CD107a
- 细胞毒性 T 细胞比例
同一患者共培养与 MHC 阻断配对对照比较；分别报告肿瘤凋亡、细胞因子分泌及 T 细胞活化。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 7 对自体类器官/TIL 在相同效靶比和时间下检测。
- 测试范围
- 7 名患者对应的 7 对配对培养。
- 参照体系
- 同一配对模型 MHC-I/II 阻断条件；另有模型独立培养。
- 研究结果
- 4 对出现较明显凋亡与 IFN-γ 反应，3 对未出现显著凋亡增加；杀伤较弱组的细胞毒性 T 细胞比例较低。
适用条件与研究局限
- 未与患者实际细胞免疫治疗结局对应。
- 长期模型缺少其他微环境细胞及外周淋巴系统。
来源与原文
- Patient-derived organoids as personalized avatars and a potential immunotherapy model in cervical cancer原始研究 · iScience · 2023-10-12