CEP290-LCA10 类器官的利血平筛选与人源验证
先以 rd16 小鼠类器官来源细胞初筛逾 6,000 种小分子，再以完整类器官和患者来源人源类器官验证利血平反应。
用途与模型
- 研究用途
- 以分层体外模型发现并验证视网膜纤毛病候选小分子，观察光感受器和纤毛表型。
- 模型与细胞来源
- rd16 小鼠诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）来源视网膜类器官及其解离细胞；同一家系的 2 名 Leber 先天性黑矇 10 型（LCA10）患者及未患病母亲的人源 iPSC 类器官。
- 方法版本
- 2023-03-28 原始研究；2023-04-21 version of record
- 实验形式
- 小鼠来源解离细胞初筛、完整小鼠类器官二筛、两名患者类器官处理，分别记录各层读数。
材料与平台
- 小鼠模型
- rd16 小鼠视网膜类器官和其解离细胞，初筛不在人源完整类器官。
- 人源家系类器官
- 未患病母亲及两名 CEP290-LCA10 患者分别提供 iPSC 来源视网膜类器官。
- 利血平
- 在人源类器官中与溶剂对照比较不同浓度处理后的视杆/纤毛表型。
测量指标与分析
- 视杆细胞荧光初筛信号
- 视紫红质染色与外侧分布
- 连接纤毛结构
- RNA 测序和 p62/蛋白酶体活性
按小鼠筛选、人源验证、组学探索分层呈现；第一名患者的详细转录组不作两名患者共同机制。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 候选小分子通过小鼠来源细胞及完整类器官筛选，利血平再与两名患者来源类器官的溶剂对照比较。
- 测试范围
- 小鼠来源初筛 >6,000 化合物；人源患者 2 名同一家系、未患病母亲 1 名；另一克隆复测方向相似但未显著。
- 参照体系
- 初筛背景对照、完整类器官未处理组、人源患者各自溶剂对照和家系正常对照。
- 研究结果
- 两名患者类器官视紫红质染色增加；转录组详细机制主要来自 LCA-1。
适用条件与研究局限
- 小鼠初筛不能写成人源完整类器官高通量筛选。
- 人源仅两名同家系患者；视觉功能与临床疗效未测。