流通式肠道单层与在线质谱转运测量
在流动条件下培养肠道细胞单层，交替检测顶侧和基侧药物，记录药物转运随时间的变化。
用途与模型
- 研究用途
- 测量药物通透性并定位细胞相关未知产物出现的位置和时间。
- 模型与细胞来源
- Caco-2 与 HT29-MTX-E12 按 3∶1 共培养，21 天后进行流通实验。
- 方法版本
- 2019 年 Caco-2/HT29-MTX-E12 流通 Transwell 系统
- 实验形式
- 流通 Transwell、独立两侧管路、切换阀/捕集柱及 UPLC-QTOF-MS。
材料与平台
- 屏障检查
- ZO-1 染色和 Lucifer yellow 通透性；超过 5% 基侧转移的单层作为泄漏样本排除。
- 流量与检测
- 顶侧 200 μL/min、基侧 100 μL/min；每 15 分钟切换采样分析侧，独立管路和捕集柱减少残留。
- 模型药物
- 维拉帕米 5 μg/mL 用于三类设置比较；格拉司琼 10 μg/mL 用于单次未知产物探索。
- 通透性计算
- 依据基侧累计转运速率、0.6 cm² 膜面积及初始顶侧药物浓度计算 Papp。
测量指标与分析
- 顶侧与基侧药物时程
- 表观通透性系数 Papp
- 未知产物质谱信号
- 实验后屏障完整性
静态、动态离线与动态在线系统分别测量同一药物通透性；未知产物记录出现侧、质荷比和信号变化。
研究设计与结果
药物集评价
- 研究设计
- 维拉帕米在静态、动态离线和动态在线系统中的比较；另开展产物探索。
- 测试范围
- 主要通透性比较为 3 次生物学重复；格拉司琼探索实验为 1 次（图 6）。
- 参照体系
- 静态 Transwell 与动态离线检测；产物另有无细胞条件比较。
- 研究结果
- 维拉帕米 Papp 分别约 20.9、19.5、20.8×10⁻⁶ cm/s。格拉司琼顶侧出现 m/z 309 未知信号。
适用条件与研究局限
- 每 15 分钟切换检测侧，同一侧每 30 分钟获得一次分析结果。
- 格拉司琼探索仅 1 次，未知信号没有完成结构鉴定或确认代谢来源。
- 主要验证少数化合物和单一共培养体系，没有在本次系统加入肝脏或消化区室。
来源与原文
- Dynamic in vitro intestinal barrier model coupled to chip-based liquid chromatography mass spectrometry for oral bioavailability studies原始研究 · Analytical and Bioanalytical Chemistry · 2019-12-21