微型刮切制备 B16 类器官的活力与抗 PD-1 功能评价
比较微型刮切工具与手工制备的气液界面（air–liquid interface，ALI）类器官，检验组织处理后的细胞活力、组成及程序性细胞死亡蛋白 1（programmed cell death protein 1，PD-1）阻断反应。
用途与模型
- 研究用途
- 为保留原肿瘤免疫细胞的体外免疫药物测试选择组织处理方式，评价制备对所测功能的影响。
- 模型与细胞来源
- 已有高微卫星不稳定性 B16 变体小鼠黑色素瘤组织；肿瘤与原有浸润免疫细胞在 ALI 条件下共同保留。
- 方法版本
- 2024 年正式原研究的 µGrater/手工制备与 6 天抗 PD-1 比较
- 实验形式
- 动物来源体外类器官，第 0/7 天活力比较；第 1 天起药物处理 6 天，第 7 天流式和酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。
材料与平台
- 组织与培养体系
- 已有 B16 肿瘤组织及其原有浸润免疫细胞，采用 ALI 培养体系。
- 制备工具与参照
- µGrater 不锈钢孔阵列、µDicer 硅微刀阵列及手工切碎参照；µDicer 比较 200、400、800 µm 三种间距。
- 药物和指标检测
- 抗小鼠 PD-1 单克隆抗体与免疫球蛋白 G（immunoglobulin G，IgG）对照；膜联蛋白 V（Annexin V）、7-氨基放线菌素 D（7-aminoactinomycin D，7-AAD）及细胞表面标志用于流式检测，培养液干扰素 γ（interferon-gamma，IFNγ）由 ELISA 检测。
测量指标与分析
- 各细胞群活细胞数/该细胞群总数
- 活免疫细胞与活肿瘤细胞的比例
- 每 10^6 活细胞中的活 CD8 T 细胞数
- 活 CD8 T 细胞中的 CD137 阳性比例
- Annexin V/7-AAD 肿瘤细胞凋亡和存活比例
- 培养液 IFNγ 浓度
制备质量以描述性比较为主；同一肿瘤配对的抗 PD-1/IgG 和 µGrater/手工结果采用 Wilcoxon 符号秩检验。未显著差异保留为小样本结果，不作为统计等效证明。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 比较手工、µDicer 及 µGrater 处理后第 0/7 天细胞活力和构成。
- 测试范围
- 主要手工/400/800 µm 和 µGrater 比较为 5 个独立肿瘤；200 µm 组为 2 个独立肿瘤。
- 参照体系
- 同源组织手工切碎及不同工具条件。
- 研究结果
- 400/800 µm 及 µGrater 组织的所测细胞活力与手工相近；200 µm 组活力及培养后免疫细胞比例较低。相同肿瘤刮切约 20 秒、手工约 1.5 分钟，速度约相差 4.5 倍。
适用条件与研究局限
- 尺寸分布仍不均匀。
- 小样本和当前 ALI 条件不能代表其他肿瘤或液体培养。
方法可行性研究
- 研究设计
- µGrater 与手工制备的类器官接受抗 PD-1 或 IgG 6 天。
- 测试范围
- 6 个独立 B16 肿瘤，来源内配对比较。
- 参照体系
- 同肿瘤的制备方法与 IgG 药物对照。
- 研究结果
- 抗 PD-1 后 CD8/CD137、肿瘤细胞凋亡及 IFNγ 总体呈增加方向，所测方向在两种制备中相近；制备方法间比较均不显著，部分药物/IgG 比较亦未显著。
适用条件与研究局限
- 功能结果为小规模可行性测试，不能证明两方法等效。
- 尚未直接验证患者组织、液体培养、其他肿瘤或临床流程。
来源与原文
- Microdissection tools to generate organoids for modeling the tumor immune microenvironment原始研究 · Microsystems & Nanoengineering · 2024-09-10