自体肿瘤类器官与外周血共培养：T 细胞扩增及杀伤评价
将患者肿瘤类器官与自体外周血淋巴细胞共培养，分别检测 T 细胞扩增、肿瘤识别及杀伤。
用途与模型
- 研究用途
- 研究患者特异性肿瘤免疫识别、抗原呈递依赖及候选免疫治疗的体外作用。
- 模型与细胞来源
- 错配修复缺陷结直肠癌及非小细胞肺癌患者的肿瘤类器官；配对外周血淋巴细胞，部分模型另有自体正常组织。
- 方法版本
- 2018 年公开作者稿所载研究版本
- 实验形式
- 2 周扩增后进行短时反应性检测，并另设 3 天杀伤实验。
材料与平台
- 扩增条件
- 类器官经干扰素 γ（interferon-gamma，IFNγ）预处理；与自体淋巴细胞按效应细胞∶靶细胞 20∶1 共培养，加入白细胞介素 2（interleukin-2，IL-2）、抗 CD28 和抗 PD-1，每周补充类器官，培养 2 周。
- 反应性检测
- 再刺激采用 2∶1 比例，5 小时检测 IFNγ 和 CD107a，24 小时检测 CD137。
- 杀伤与识别对照
- 杀伤实验按 5∶1 共培养 3 天，以Ⅰ类主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex class I，MHC-I）阻断及自体正常组织检验特异性；识别实验另设去除 Geltrex 3 天的基质干扰对照。
测量指标与分析
- 流式测量肿瘤刺激后的 IFNγ、CD107a、CD137 及反应性 CD8 T 细胞比例。
- 用活肿瘤上皮细胞计数和 caspase-3/7 成像测量杀伤。
分别报告具备 MHC-I 呈递能力的模型与全体患者的扩增成功率。把肿瘤、正常组织及基质引起的反应分别比较，结合 MHC-I 阻断分析杀伤依赖。
研究设计与结果
方法可行性研究
- 研究设计
- 患者自体模型中的 T 细胞扩增及功能验证。
- 测试范围
- 13 例结直肠癌患者及 6 例非小细胞肺癌；其中 8 例结直肠癌患者的 9 个模型具有 MHC-I 表达。
- 参照体系
- 培养前淋巴细胞、自体正常组织、肿瘤组织消化物、MHC-I 阻断及基质对照。
- 研究结果
- MHC-I 阳性的结直肠癌患者成功 4/8，全体结直肠癌患者成功 4/13；肺癌患者成功 2/6。部分扩增 T 细胞可杀伤自体肿瘤类器官。
适用条件与研究局限
- 患者数量较少；基质可引起 CD4 T 细胞非肿瘤反应；体外功能尚未与临床细胞回输结果配对。