ALS 患者来源内皮样细胞的 Wnt 激活与屏障恢复评价
CHIR99021 改善患者模型连接染色、单层阻抗和小分子通透，降低 VCAM-1；ICAM-1 无显著下降。
用途与模型
- 研究用途
- 用患者来源内皮样细胞比较候选干预对连接、屏障功能和炎症黏附分子的影响。
- 模型与细胞来源
- 1 位携带 TARDBP N345K 杂合变异的肌萎缩侧索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）患者及 2 位健康供者的诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC），生成脑微血管内皮样细胞；另 2 个同基因背景变异克隆作参照。
- 方法版本
- 原文 2024-08-15 版本
- 实验形式
- Transwell 单层通透、16 孔电极板阻抗、流式黏附分子及 96 孔静态免疫细胞黏附分别评价。
材料与平台
- 细胞来源
- 患者来源内皮样细胞、健康对照；部分炎症检测使用同克隆平滑肌样细胞条件培养液。
- 药理比较
- CHIR99021 4 μM 与 二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶剂对照；检测已分化细胞的屏障恢复，观察的是已形成的模型。
- 功能检测
- 荧光素钠通透、连接蛋白染色、无量纲归一化细胞指数及 细胞间黏附分子 1（ICAM-1）与血管细胞黏附分子 1（VCAM-1） 流式检测。
测量指标与分析
- 荧光素钠通透性
- 单层归一化细胞指数
- claudin-5/occludin 连接连续性
- ICAM-1 和 VCAM-1 表面表达
- 静态免疫细胞黏附数量
按健康/患者来源及药理处理分别比较；阻抗、示踪与黏附实验保留各自条件和分母。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 患者模型与 2 位健康供者；CHIR99021 与溶剂；其他变异克隆与其同基因背景对照。
- 测试范围
- 患者来源克隆来自 1 位供者；各克隆至少 5 次分化用于建模重复性。阻抗每条件至少 3 孔并至少重复 2 次；Fig.7D 为 3 个独立分化实验。
- 参照体系
- 患者模型与 2 位健康供者；CHIR99021 与溶剂；其他变异克隆与其同基因背景对照。
- 研究结果
- CHIR99021 改善患者模型连接染色、单层阻抗和小分子通透，降低 VCAM-1；ICAM-1 无显著下降。
适用条件与研究局限
- 主要疾病来源仅一位患者，供者背景与变异作用未分离。
- 模型未纳入周细胞/星形胶质细胞/血流，免疫实验仅测静态黏附。
- 没有患者疗效、完整血脑屏障药代或监管资格认定结果。
来源与原文
- Establishment of a novel amyotrophic lateral sclerosis patient (TARDBP N345K/+)-derived brain microvascular endothelial cell model reveals defective Wnt/β-catenin signaling: investigating diffusion barrier dysfunction and immune cell interaction原始研究 · Frontiers in Cell and Developmental Biology · 2024-08-15