保留原免疫成分的患者肿瘤类器官纳武利尤单抗评价
气液界面（air–liquid interface，ALI）培养患者肿瘤片段，比较纳武利尤单抗对程序性细胞死亡蛋白 1（programmed cell death protein 1，PD-1）相关 T 细胞活化和肿瘤杀伤的影响。
用途与模型
- 研究用途
- 研究原有局部肿瘤免疫环境中的药物反应与供者差异。
- 模型与细胞来源
- 活化试验为 20 个独立手术肿瘤模型：9 个非小细胞肺癌、8 个透明细胞肾癌、3 个黑色素瘤。杀伤试验另用 10 个模型：5 个肾癌、3 个肺癌、1 个膀胱癌、1 个黑色素瘤。
- 方法版本
- 2018 年接受作者稿（稿件编号 NIHMS1516243）中的人源 7 天功能试验
- 实验形式
- 胶原支持的气液界面组织培养，7 天药物功能比较。
材料与平台
- 患者肿瘤及培养支持
- 手术组织片段、I 型胶原及膜底培养插入物；培养体系支持部分原有免疫和间质细胞，白细胞介素 2（interleukin-2，IL-2）用于免疫细胞保留的比较。
- 药物与对照
- 纳武利尤单抗与同型免疫球蛋白 G4（immunoglobulin G4，IgG4）对照；独立杀伤试验同时采用抗 CD3 和抗 CD28 刺激。
- 活化和杀伤检测
- 荧光激活细胞分选（fluorescence-activated cell sorting，FACS）及定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）；膜联蛋白 V（Annexin V）与 7-氨基放线菌素 D（7-aminoactinomycin D，7-AAD）用于肿瘤细胞死亡检测。
测量指标与分析
- 分选 CD3 阳性 T 细胞的 IFNG、PRF1 和 GZMB 相对转录水平
- CD8 T 细胞数量变化
- Annexin V/7-AAD 肿瘤细胞死亡比例
- T 细胞 PD-1 表达与程序性细胞死亡配体 1（programmed death-ligand 1，PD-L1）免疫组化的关联
纳武利尤单抗结果与 IgG4 对照比较；活化转录指标、T 细胞扩增和肿瘤细胞死亡分别评价。qRT-PCR 图示采用 3 次技术测定。
研究设计与结果
方法可行性研究
- 研究设计
- 20 个独立手术肿瘤模型接受纳武利尤单抗或 IgG4 7 天活化比较。
- 测试范围
- 肺癌 9 个、透明细胞肾癌 8 个、黑色素瘤 3 个。
- 参照体系
- 同模型 IgG4 对照及 PD-L1 免疫组化、T 细胞频率等特征。
- 研究结果
- 6/20 模型至少一项 IFNG、PRF1 或 GZMB 升高超过 5 倍：肺癌 3/9、肾癌 2/8、黑色素瘤 1/3。CD8 增加超过 35% 出现在 5/6 活化响应模型与 2/14 未响应模型；PD-L1 免疫组化仅与 GZMB 显著相关，r=0.51。
适用条件与研究局限
- 活化转录指标升高不直接代表肿瘤杀伤。
- 未与同患者免疫治疗疗效配对。
方法可行性研究
- 研究设计
- 独立的 10 个患者模型在抗 CD3/抗 CD28 刺激下比较纳武利尤单抗和 IgG4。
- 测试范围
- 肾癌 5 个、肺癌 3 个、膀胱尿路上皮癌 1 个、黑色素瘤 1 个。
- 参照体系
- 同模型 IgG4 条件。
- 研究结果
- 2/10 模型出现纳武利尤单抗相关肿瘤细胞死亡，分别来自肾癌和膀胱癌，并伴随 T 细胞扩增与活化。
适用条件与研究局限
- 新鲜培养物存在不同程度基础坏死。
- 免疫成分随培养时间减少，长期保留与临床预测仍待验证。
来源与原文
- Organoid modeling of the tumor immune microenvironment原始研究 · Cell · 2018-12-13