猪肾上皮细胞建立成对运输屏障
北京团队在 Drug Delivery 报告一种用于早期脑药物分布筛选的血脑屏障（BBB）替代模型。LLC-PK1 是猪肾上皮细胞系，团队比较空载体对照 MOCK 与稳定表达人体多药耐药基因 MDR1 的细胞；后者产生 P-糖蛋白（P-gp）外排功能。
两类细胞分别在 Transwell 多孔膜插入式培养小室形成单层。MOCK 每小室接种 20,000 个细胞，在第 4 天测运输；MDR1 组接种 10,000 个细胞，在第 7 天测运输。实际运输阶段的跨上皮电阻分别为 132 ± 15、89 ± 11 Ω·cm²，团队同时用荧光素黄检测细胞间泄漏。
2 μM 地高辛在 MDR1 屏障中的外排比为 11.52 ± 1.34，MOCK 为 0.89 ± 0.04。加入 5 μM P-gp 抑制剂 tariquidar 后，MDR1 外排比降至 0.99；MOCK 的通透性和外排比均未出现显著变化。这组配对实验支持 MDR1 细胞具有定向外排功能。
41 种药物的体外运输与大鼠脑分布
研究在 2 μM、2 小时条件下检测 41 种药物，从膜的两侧分别给药，测量表观通透系数、外排比和药物回收率。外排比为基底侧至顶端侧与反方向通透系数之比；液相色谱—串联质谱用于测定各侧药物量。
体内参照中，32 种药物的脑分布数据沿用文献或既有研究数据，另外 9 种由本研究在雄性大鼠中测量：每种药物静脉给予 1 mg/kg，在 5 个时间点分别取 3 只大鼠的血浆和脑组织。团队用脑与血浆的浓度—时间曲线下面积比，再结合两类组织的游离比例，计算脑内游离药物分布系数 Kp,uu,brain。
作者从药物面板选取 20 种用于相关拟合，比较体外通透系数与大鼠 Kp,uu,brain。MDR1 模型的相关系数 R 为 0.8886，MOCK 为 0.5984；MOCK 对部分 P-gp 底物的体外通透性估计较高。对蛋白结合超过 99% 的药物，作者将游离比例设为 0.01，因此极高结合药物的参照还受这一取值影响。
17 种初始预测在 2 倍误差内，4 种干预后改善
剩余 21 种药物用于留出测试，最初有 17 种预测值落在大鼠参照的 2 倍误差范围内，另 4 种偏离较大。阿米替林、粉防己碱、舒尼替尼和帕罗西汀的液相回收率低于 80%；提取细胞内药物后，回收率提高，提示细胞蓄积参与了药物损失。
团队加入 1 μM 巴佛洛霉素 A1（Bafilomycin A1），抑制溶酶体酸化。4 种药物的回收率升至 80%–120%，顶端至基底侧通透系数提高；用干预后的通透数据重算，预测值进入原设定的误差范围。作者据此认为，细胞模型中过强的溶酶体蓄积影响了这 4 种药物的预测。
这项干预还改变了外排：另一组地高辛对照实验中，MDR1 外排比由 9.73 降至 6.0。阿替洛尔通透性未显著改变，支持该条件下单层仍保持屏障，但 P-gp 活性也受影响。因而，干预后的改善需要连同回收率和外排变化解释。
适用范围集中于小分子及 P-gp 相关运输
研究用相对简单的细胞屏障结合药物回收与大鼠分布参照，比较被动通透、定向外排和细胞蓄积对结果的影响。留出测试来自同一 41 种药物面板，4 个偏离样本的改进又使用了后续干预数据。
模型的细胞来源和组织结构仍与人脑微血管不同，缺少周细胞、星形胶质细胞等相互作用，对乳腺癌耐药蛋白（BCRP）等其他转运体的适用性有限。作者建议让细胞共表达更多转运体，并引入干细胞来源的 BBB 类器官等方法。当前证据主要支持小分子和 P-gp 相关运输评价。