多供者散发性 ALS 运动神经元的连续成像药物评价
每天追踪患者诱导多能干细胞（iPSC）衍生运动神经元突起，以衰退日期比较单药和组合。
用途与模型
- 研究用途
- 散发性 ALS 的早期药物筛选与供者差异评价。
- 模型与细胞来源
- 患者皮肤成纤维细胞重编程的 iPSC 为主；群体表型 65 名散发性 ALS 供者、22 名健康对照，药筛与确认使用独立规定的供者子集。
- 方法版本
- 2025 年原研究版本
- 实验形式
- 第 19 天转入 384 孔板；人 laminin-521 基底，37 °C、5% O₂ 和 5% CO₂；第 26 天移除成熟培养因子，第 32 天移除 purmorphamine。
材料与平台
- 连续成像
- 第 21 天以小鼠 Hb9 增强子与 Hsp68 最小启动子驱动的 turboGFP 腺病毒标记运动神经元，感染复数（MOI）10；每 24 小时成像，量化总神经突起长度并按各孔峰值归一化。
- 给药
- 第 36 天起给药；每 3–4 天更换一半含药培养基。初始剂量比较 0–50 µM；107 种药物初筛与 3 种药物确认各为 2.5 µM。
- 质量与终点
- 排除突起总长度持续低于 12,500 µm、第 39 天前已达终点或超过 25% 时间点量化失败的孔；失败时间点统计不含第 50–60 天。终点为突起长度降至峰值 50% 的日期；若观察结束时仍未降至 50%，采用实验结束日期。初筛保护时长为药物组终点减同供者全部受试处理的平均终点；确认实验为药物组终点减同供者二甲基亚砜（DMSO）对照终点。
测量指标与分析
- 总神经突起长度
- 衰退终点日期
- 保护时长
- 供者响应比例
初筛 16 名供者、每药每人 2 孔；确认 15 名供者，单药和组合每组 4 孔。孔为技术重复，供者为生物比较单位。
研究设计与结果
药物集评价
- 研究设计
- 先复测已进入临床试验的药物，再延长观察比较单药、两药与三药组合。
- 测试范围
- 107 项药物在 16 名散发性 ALS 供者上初筛；确认实验 15 名供者。
- 参照体系
- 初筛：同供者全部受试处理的平均衰退终点；确认：同供者 DMSO 对照、利鲁唑、巴瑞替尼、美金刚及其组合。
- 研究结果
- 初筛 3 项保护；确认实验利鲁唑约延后 4.7 天、巴瑞替尼 13 天、美金刚单药与对照的差异未达到显著性；三药组合平均延后约 30.3 天。
适用条件与研究局限
- LD50 在此定义为突起衰退日期，药效为细胞培养终点。
- 初筛观察窗口限制最大可量化保护时长；确认采用更长时间条件。
- 主要为运动神经元培养，未包含完整胶质细胞环境。
- 临床关联为回顾性相关；尚需前瞻性预测验证。
来源与原文
- Large-scale drug screening in iPSC-derived motor neurons from sporadic ALS patients identifies a potential combinatorial therapy原始研究 · Nature Neuroscience · 2025-11-24