含巨噬细胞的肺间质芯片评价 RAGE 抗体作用
在人内皮—肺成纤维细胞—巨噬细胞共培养芯片中，比较炎症刺激与晚期糖基化终末产物受体（RAGE）阻断对屏障和间质指标的影响。
用途与模型
- 研究用途
- 炎症相关肺间质损伤机制及抗体候选的早期作用评价。
- 模型与细胞来源
- 人脐静脉内皮细胞（HUVEC，P2–5）、正常人肺成纤维细胞（P3–6）、外周血单核细胞衍生巨噬细胞；没有肺泡上皮。
- 方法版本
- 2025 年原研究版本
- 实验形式
- 纤维蛋白 2.8 mg/mL、胶原 I 0.3 mg/mL，巨噬细胞和成纤维细胞各 1×10⁵ 个/mL；次日通道接种 HUVEC 1.5×10⁴ 个。第 4 天处理。
材料与平台
- 刺激和阻断
- TOX（thymocyte selection-associated high mobility group box protein）0.1 µg/mL；博来霉素 10 ng/mL；晚期糖基化终末产物受体（RAGE）抗体 10 µg/mL 预处理 1–3 小时，主要结果使用 1 小时。
- 屏障检测
- 40 kDa 荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记葡聚糖 10 µM；停止灌流后记录前 5 分钟的泄漏，按模型计算通透。
- 间质检测
- 比较 α 平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白、VE-cadherin、ICAM1、胶原和细胞形态；第 5 天培养液检测细胞因子相对信号。
测量指标与分析
- 葡聚糖通透
- 纤维化相关标志
- 内皮连接和炎症标志
- 胶原荧光强度
- 成纤维细胞形态
完整共培养与去巨噬细胞模型分别比较；屏障量化完整模型 n=3、去巨噬细胞模型 n=5，均为实验重复。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- TOX/博来霉素刺激后比较有无 RAGE 抗体，并用去巨噬细胞模型检验屏障反应。
- 测试范围
- 完整模型通透 n=3；去巨噬细胞模型通透 n=5。
- 参照体系
- 未刺激、TOX、博来霉素、RAGE 抗体预处理加 TOX。
- 研究结果
- TOX 通透约增加 3.8 倍，抗体加 TOX 与对照 NS；去巨噬细胞后通透差异 NS。部分 ICAM1 和胶原异常在阻断后仍存在。
适用条件与研究局限
- HUVEC 为脐静脉内皮来源，模型没有肺泡上皮。
- 巨噬细胞诱导时长在方法为 7 天、结果为 5 天，两处记载不同。
- 抗体主要为刺激前处理，未验证长期已形成纤维化的逆转。
- 患者灌洗液仅作标志比较，没有本研究抗体治疗。
来源与原文
- Engineering an immune-integrated lung-on-a-chip to reveal TOX–RAGE axis–driven fibrosis and RAGE blockade as a therapeutic strategy原始研究 · Nano Convergence · 2025-12-18