H9 衍生肺泡类器官的 TGF-β 损伤与抗纤维化候选筛选
以急性肺泡类器官损伤筛选抗纤维化相关化合物，再以形态和成纤维细胞收缩确认。
用途与模型
- 研究用途
- 肺泡细胞保护候选的早期筛选。
- 模型与细胞来源
- H9（WA09）人胚胎干细胞；分化后分选 CD47 高/CD26 低细胞，形成肺泡Ⅱ型细胞样类器官。
- 方法版本
- 2025 年原研究版本
- 实验形式
- 第 15–30 天分选后以 200 个细胞/µL 包埋于 Matrigel，表征 SFTPC、ABCA3 等肺泡相关标志。
材料与平台
- 刺激与筛选
- 转化生长因子 β1（TGF-β1）50 ng/mL；320 种抗纤维化相关化合物，各 10 µM。处理 48 小时后以 WST-8 测 450 nm 吸光度，候选界线为 0.65。
- 信号与形态
- 24 小时检测 pSMAD2、纤连蛋白和细胞状态相关标志；后续用明场形态确认类器官保护。
- 独立细胞确认
- 成纤维细胞凝胶收缩实验：2×10⁵ 个细胞/mL，20 µL Geltrex 滴成胶后培养，比较有无 TGF-β 和各候选的收缩面积。
测量指标与分析
- WST-8 检测的 450 nm 吸光度
- 类器官形态
- 纤维化相关标志
- 凝胶收缩面积
按活性界线初选，再以形态和独立成纤维细胞收缩实验确认；对照与损伤的活性比较 n=3。
研究设计与结果
药物集评价
- 研究设计
- 单因子刺激下进行 320 项筛选并验证候选。
- 测试范围
- 单一 H9 细胞系类器官；320 项化合物；7 项形态确认候选。
- 参照体系
- 未刺激、TGF-β1、TGF-β1 加候选药物。
- 研究结果
- 主文初选 9 项，后续 7 项确认；ibudilast 与 regorafenib 初筛表现未在形态确认中保留。
适用条件与研究局限
- 方法部分的 CCK-8 活性检测处理 3 天，Figure 3 筛选的处理时长为 48 小时。
- 初筛候选数在主文和后续比较为 9 种，Figure3C 图注为 10 种，两处记载不同。
- 独立成纤维细胞实验未构成与类器官共培养。
- 短期单因子损伤缺少完整慢性纤维化环境和临床预测验证。
来源与原文
- 3D alveolar organoid drug screening model for targeting TGF-β1 in pulmonary fibrosis原始研究 · Biochemistry and Biophysics Reports · 2025-08-11