可扩增人肝细胞类器官与门管区组装体的功能评价
扩增人组织肝细胞类器官，分化后以细胞色素 P450（CYP）底物和维拉帕米产物比较原代培养，再以多细胞组装检验门管区功能。
用途与模型
- 研究用途
- 获得可扩增、保留供者差异的肝细胞材料，评价药物代谢及细胞组成对肝功能的影响。
- 模型与细胞来源
- 上皮细胞黏附分子（EpCAM）阴性原代人肝细胞形成类器官；可结合胆管类器官与门管区成纤维细胞，条件允许时取同一供者。
- 方法版本
- 2025 年患者来源扩增/分化、维拉帕米与多细胞组装版本
- 实验形式
- Matrigel/BME2 包埋扩增超过 3 个月、每周 1:2 传代；分化培养后给药；96 孔或 AggreWell 组装后再入 Matrigel 维持。
材料与平台
- 培养
- WNT 激活与 LATS1/2 抑制配合扩增，去除烟酰胺；分化培养减少 Yes 关联蛋白（YAP）及 FGFR2 刺激并加入地塞米松。
- 药物功能
- CYP2C9/CYP3A4 底物活性；维拉帕米 4 μM 处理 6 小时，用直接进样串联质谱检测上清和细胞的去甲维拉帕米。
- 组装
- 96 孔优化 1 个肝类器官、25 个门管区成纤维细胞、100 个胆管细胞；AggreWell 每孔投入 100 个肝类器官、7500 个成纤维细胞和 30000 个胆管细胞。
测量指标与分析
- CYP2C9 和 CYP3A4 底物活性
- 去甲维拉帕米生成率
- 白蛋白分泌
- 尿素生成
- 糖异生
- 胆小管连接及门管区组织结构
按供者和培养状态比较功能；上清与细胞中的代谢产物合并，归一化为 pmol/小时/10,000 个细胞；分别评价组装后的门管区功能和药物代谢。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 扩增/分化类器官与 1 天和 7 天原代培养比较；另将肝类器官和胆管、间质组装评价功能。
- 测试范围
- 建模库 28 位供者，11–85 岁；CYP 为 7 位类器官供者、4 位 7 天原代及 9 位 1 天原代。维拉帕米 3 位供者；组装体尿素 3 位、糖异生 4 位。
- 参照体系
- 分化与扩增状态、1 天/7 天原代参照、胆管阴性参照；肝类器官与门管区组装体。
- 研究结果
- 分化类器官 CYP2C9 接近 7 天原代、CYP3A4 略低，两项低于 1 天原代；维拉帕米产物高于 1 天原代。组装提高尿素和糖异生，部分药物代谢功能减弱。
适用条件与研究局限
- 不同功能使用不同供者子集，建模库人数不等同药物试验人数。
- 维拉帕米结果限于具体药物、浓度及培养条件，酶协同为作者解释。
- 组装体缺少免疫、其他间质及门管区血管，尚未构成完整门管三联结构。
来源与原文
- Human assembloids recapitulate periportal liver tissue in vitro原始研究 · Nature · 2025-12-17