RB1 失活视网膜类器官的候选药物筛选
用同基因背景的 RB1 失活与正常视网膜类器官逐级筛选候选药物，并观察增殖视锥前体和凋亡变化。
用途与模型
- 研究用途
- 视锥前体相关视网膜母细胞瘤亚型的体外候选药物比较。
- 模型与细胞来源
- 单患者来源 iPSC 建立的 RB1 失活及正常对照视网膜类器官；第 150 天用于本次药物评价。
- 方法版本
- 2026 年第 150 天类器官与 72 小时暴露版本
- 实验形式
- 三维视网膜类器官，72 小时药物暴露；活细胞成像、组织染色、流式及单细胞分析分别检测。
材料与平台
- 死亡相关成像
- IncuCyte SX5 与 Cytotox Green/NIR 染料，按时间记录死亡相关荧光。
- 目标细胞与凋亡
- RXRγ/Ki-67、RXRγ/caspase-3 染色；Annexin V/7-AAD 流式检测。
- 药物条件
- 37 种初筛候选，拓扑替康参照；6 种复筛候选与 ABT-737、luminespib 的进一步浓度比较。
测量指标与分析
- 死亡相关荧光随时间变化
- RXRγ/Ki-67 双阳性细胞比例
- RXRγ/caspase-3 双阳性细胞比例
- 流式早晚期凋亡及坏死分类
- 单细胞群组成
首轮比较 RB1 失活模型与溶剂；第 2 轮加入正常同基因背景模型及多浓度；随后单独检测增殖视锥群和凋亡。细胞毒性与增殖细胞群变化在不同药物浓度下评价。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 37 药物初筛，6 候选进一步染色及流式，2 候选作浓度比较和单细胞分析。
- 测试范围
- 单患者来源细胞背景；固定浓度的视锥染色比较每条件 5 个类器官，流式为 3 次独立实验；单细胞测序仅 1 次。
- 参照体系
- RB1 正常同基因背景、溶剂及拓扑替康等参照；剂量与检测指标分别比较。
- 研究结果
- ABT-737 在 7.5 μM、luminespib 在 2.5–7.5 μM 显著减少增殖视锥前体；两药均增加凋亡。
适用条件与研究局限
- 模型覆盖单患者及视锥前体相关亚型，未在其他分子亚型或多患者中完成验证。
- 单细胞仅 1 次实验，其他细胞群变化没有统计显著性评价。
- 2.5 μM 的 ABT-737 在细胞毒性筛选中有效，但显著减少增殖视锥前体的作用只见于 7.5 μM。
- RPE Transwell 的通透检测与类器官 LC-MS/MS 分析使用不同模型和试验。
来源与原文
- Retinal organoid screening reveals ABT-737 and luminespib as potential agents against a cone- precursor-derived subtype of retinoblastoma原始研究 · Molecular Therapy Oncology · 2026-02-19