人原代肾小管类器官的反复顺铂损伤与条件培养液试验
在人原代肾小管三维组织中诱发反复顺铂损伤，结合衰老标志与条件培养液的成纤维细胞功能试验。
用途与模型
- 研究用途
- 研究反复小管药物损伤后的细胞衰老及上皮与成纤维细胞间的信号作用。
- 模型与细胞来源
- 非肿瘤人肾皮质来源原代近端小管上皮细胞形成的肾小管类器官（tubuloids）；主下游试验使用人肺成纤维细胞。
- 方法版本
- 2025 年 5 轮顺铂处理及下游成纤维细胞测量版本
- 实验形式
- 二维扩增、低吸附聚集及 Matrigel 培养后，进行 5 轮 0.2 或 2 μg/mL 顺铂处理；每轮 3 次换液洗药并恢复 1 天。
材料与平台
- 三维组织形成
- 原代细胞二维扩增 7–10 天；每孔约 50 万细胞聚集 2 天，加入 Matrigel 与生长因子，通常自三维培养开始 1–2 周可用于实验。
- 损伤与衰老测量
- 急性顺铂 0.2、2、20 μg/mL 比较；反复处理排除 20 μg/mL。测量 β-半乳糖苷酶、p16/p21/p53、核纤层蛋白 B1（Lamin B1）与细胞周期。
- 条件培养液功能试验
- 洗药后收集 48 小时无血清条件培养液，再处理成纤维细胞 48 小时，测量 α-平滑肌肌动蛋白、胶原 I、凝胶收缩和迁移。
测量指标与分析
- 组织结构与损伤标志
- 衰老相关染色和蛋白
- G2/M 细胞周期比例
- 白细胞介素 1β 和 6 的基因（IL1B/IL6）表达
- 成纤维细胞纤维化标志
- 胶原凝胶收缩及迁移
将急性高浓度损伤与反复低浓度方案分开；反复处理后以洗药的条件培养液评价下游细胞，并设直接顺铂处理成纤维细胞对照。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 5 轮 0.2 或 2 μg/mL 顺铂与未处理组织比较，随后开展条件培养液、直接顺铂及对照培养液的成纤维细胞比较。
- 测试范围
- 蛋白与基因定量中，1 孔多个小管类器官合并为 1 份样本；炎症基因定量 n=3，凝胶收缩与迁移各 n=2。
- 参照体系
- 未处理小管组织、两种反复顺铂浓度、对照条件培养液与直接顺铂处理成纤维细胞。
- 研究结果
- 反复处理产生多项衰老标志及 IL1B/IL6 表达增加；损伤组条件培养液增强成纤维细胞 α-平滑肌肌动蛋白、胶原 I、收缩和迁移，直接顺铂对照没有同样纤维化标志响应。
适用条件与研究局限
- 细胞组成包含多种上皮状态，近端小管样比例约 60%–65%。
- 主下游细胞来自人肺，肾来源成纤维细胞补充采用小鼠细胞。
- 条件培养液未通过特定分泌因子阻断确定主要因果信号。
- 当前试验使用顺铂建立损伤流程，尚未测试抗纤维化候选药物集。
来源与原文
- A Human Kidney Tubuloid Model of Repeated Cisplatin‐Induced Cellular Senescence and Fibrosis for Drug Screening原始研究 · Advanced Healthcare Materials · 2025-10-09