混合肺细胞类器官的肺泡 1 型分化候选筛选
在小鼠肺泡上皮、间质和免疫细胞共培养中施加转化生长因子 β1（TGF-β1），以 Hopx 相关绿色荧光蛋白（GFP）球体数量和累积荧光筛选促进肺泡 1 型细胞相关分化的分子。
用途与模型
- 研究用途
- 发现促进肺泡修复的候选分子，比较分子对上皮分化及间质细胞状态的影响。
- 模型与细胞来源
- 8–13 周龄雄性 Hopx-GFP 小鼠远端肺组织的混合细胞，保留上皮、间质与免疫组分。
- 方法版本
- 2025 年 16,800 种化合物筛选及 DB-11-BE87 复核版本
- 实验形式
- 384 孔板，每孔 10,000 个细胞和 20 μL 含 50% Matrigel 的体系；培养开始同时加入促纤维化因子和候选。
材料与平台
- 初筛处理
- TGF-β1 0.5 ng/mL、待测化合物 10 μM；galunisertib 30 μM 为阳性参照。
- 成像与判别
- 第 10–11 天加入活细胞染料，24 小时后成像；ilastik 像素分类配合 CellProfiler 识别球体，并按面积和 GFP 强度过滤。
- 后续比较
- 候选浓度曲线、上皮单独培养、活性较低类似物、芳香烃受体（AHR）激动剂/拮抗剂和单细胞转录分析。
测量指标与分析
- Hopx-GFP 阳性球体数量
- 累积 GFP 信号
- Hopx 与肺泡细胞标志表达
- 异常上皮和成纤维细胞状态比例
- AHR 报告基因响应
初筛要求数量与累积 GFP 同时超过中位数加 3 倍标准差；再比较剂量效应、培养阶段和细胞组分，分析相关分化与间质状态变化。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 从 16,800 种分子中筛出 100 个命中，优化候选后比较混合与上皮单独培养，辅以单细胞分析及 AHR 相关干预。
- 测试范围
- 候选曲线为单次实验，每浓度 4 个独立孔、96 个未处理孔；单细胞分析每条件 3–4 个培养样本、1 次实验，质控后 117,450 个细胞。
- 参照体系
- 溶剂、galunisertib、DB-11-BE87、活性较低类似物；混合与上皮单独培养；AHR 激动剂与拮抗剂。
- 研究结果
- 以 DB-11-BE87 引起的球体数量变化计算，半数有效浓度（EC50）为 151 nM；上皮单独培养未观察到同样增加。第 11 天肌成纤维与异常上皮细胞减少，第 3 天肌成纤维转变尚未明显改变。
适用条件与研究局限
- 主筛选来源为小鼠肺，不含人源模型验证。
- 从培养开始共同给药，尚未测试形成纤维化后的逆转。
- AHR 线索尚缺候选直接结合和遗传依赖验证。
- 单细胞轨迹来自转录状态推断。
来源与原文
- Triggering AHR resolves TGF-β1 induced fibroblast activation and promotes AT1 cell regeneration in alveolar organoids原始研究 · Communications Biology · 2025-07-09