微纤维基质 THLE-2 三维肝毒性浓度反应
将永生化人肝细胞系 THLE-2 培养为微纤维基质支持的三维球体，与二维培养比较 3 种药物及 2 种肝毒性处理的代谢、凋亡相关和分泌反应。
用途与模型
- 研究用途
- 评估培养格式对药物肝细胞浓度反应的影响，结合合成功能检测毒性变化。
- 模型与细胞来源
- THLE-2 人肝细胞系；另有原代小鼠肝细胞三维浓度曲线比较。
- 方法版本
- 2025 年 AccuMatrix 微纤维与二维 THLE-2 比较版本
- 实验形式
- 三维球体在 96 孔低吸附板与明胶相关微纤维细胞外基质共同培养，药物试验前培养 7 天；二维参照为胶原包被孔板。
材料与平台
- 处理
- 曲格列酮、对乙酰氨基酚、顺铂、硫代乙酰胺和乙醇；主要比较 72 与 96 小时反应。
- 活性与凋亡相关测量
- MTT 比色信号、活性氧荧光、半胱天冬酶 3/7 信号；另检测白蛋白与尿素。
- 基线功能
- 球体大小和细胞计数试剂 CCK-8 的长培养代谢信号；白蛋白及细胞色素 P450 3A4（CYP3A4）免疫染色，后者用于蛋白信号观察。
测量指标与分析
- MTT 浓度反应与半数抑制浓度（IC50）
- 活性氧信号
- 半胱天冬酶 3/7 信号
- 白蛋白与尿素
- 球体大小
- CYP3A4 免疫染色
按相同药物与时间比较二维/三维信号及浓度曲线；另将宽浓度三维 THLE-2 曲线与原代小鼠比较，分别评价文献参照值。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 比较二维与微纤维三维 THLE-2 的 72/96 小时反应，辅以 96 小时凋亡相关及分泌测量；另有原代小鼠三维曲线。
- 测试范围
- 至少 3 个生物学重复，各实验包含 3 个技术重复。
- 参照体系
- 二维胶原 THLE-2、微纤维三维 THLE-2、相应无药组；独立试验中的原代小鼠肝细胞。
- 研究结果
- 96 小时 100 μM 曲格列酮 MTT 信号二维约 5.9%、三维 43.3%；100 μM 对乙酰氨基酚约 15% 与 67.4%。表 1 曲格列酮 IC50 二维 16.26 μM、三维 70.9 μM；三维尿素的处理变化未显著。
适用条件与研究局限
- THLE-2 为永生化细胞系，未与原代人肝细胞直接比较。
- MTT 是代谢信号；CYP3A4 染色不测催化活性。
- 表 1 将对乙酰氨基酚三维 IC50 列为高于 100 μM，讨论给出 163.4 μM。
- 二维与三维处理前培养时间不同；人体参照来自文献，未进行独立患者结局验证。
来源与原文
- A Microfibrous Extracellular Matrix Platform for In Vitro Hepatotoxicity Screening: A Next-Generation Model for Humanized Liver Research原始研究 · ACS Pharmacology & Translational Science · 2025-12-11