磁辅助 ASO 的视网膜递送与外显子跳跃评价
在不同朝向的离体视网膜和人源类器官中测量磁辅助反义寡核苷酸（ASO）的分布，并在小鼠 Ush2a 突变模型中检测外显子跳跃。
用途与模型
- 研究用途
- 比较核酸载体进入视网膜的层次与细胞摄取，结合小鼠组织检测剪接活性。
- 模型与细胞来源
- 小鼠和猕猴离体视网膜、保留色素上皮等结构的小鼠组织复合体，以及携带 USH2A c.8559-2A>G 变异的患者来源诱导多能干细胞（iPSC）分化的视网膜和内耳类器官。小鼠剪接验证来自 Ush2a 突变模型。
- 方法版本
- 2025 年原研究版本
- 实验形式
- 离体组织按神经节细胞侧或感光细胞侧朝上培养；复合体另采用 20 μL/min 动态培养。人源类器官分别在分化第 80 天和第 30 天测试。
材料与平台
- ASO 与复合物
- Cy3 标记对照 ASO 用于摄取；mQR421a 用于小鼠 Ush2a 外显子 12 跳跃。与转染试剂及 CombiMag 磁性颗粒形成复合物，磁板引导 1 小时后移除。
- 暴露条件
- 剪接比较为 200 nM mQR421a、处理 2 天；人源视网膜类器官比较无磁颗粒第 2/7 天与磁辅助第 1/2 天，内耳类器官为 200 nM、7 天。
- 检测与控制
- 共聚焦观察分层分布和感光细胞前体标记 CRX 区域，流式测量 Cy3 阳性比例，聚合酶链式反应（PCR）检测外显子跳跃；裸 ASO、转染试剂辅助及磁辅助组分别比较。
测量指标与分析
- ASO 层间荧光分布
- Cy3 阳性细胞比例及荧光强度
- 小鼠 Ush2a 外显子 12 跳跃比例
- 组织形态、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及应激相关指标
组织分层荧光与流式阳性率分别计算；PCR 比较完整与跳跃转录本。环己酰亚胺处理及完整组织复合体各自分析，按相应实验条件报告剪接结果。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 小鼠离体视网膜中比较 200 nM 裸 ASO、转染试剂辅助 ASO 与磁辅助复合物；另测环己酰亚胺处理和完整组织复合体。
- 测试范围
- 各图报告至少 3 个实验样本，来自离体组织培养重复；猕猴组织切片分别用于不同处理。
- 参照体系
- 不同载体条件、组织方向及 RNA 处理条件。
- 研究结果
- 基本条件的外显子跳跃约为 3%、6%、7%；环己酰亚胺条件磁辅助约为 20%，完整组织复合体实验磁辅助约为 27%。
适用条件与研究局限
- 剪接验证采用小鼠 mQR421a 和外显子 12。
- 环己酰亚胺改变可检测转录本，相关数值限于该处理条件。
- 猕猴组织出现 Müller 细胞形态改变；GFAP 在相关比较中无显著升高。
实验条件比较
- 研究设计
- 80 天人源视网膜类器官作 4 条件荧光递送比较，30 天内耳类器官比较 7 天摄取。
- 测试范围
- Figure 8 各定量至少 3 个样本；Figure 9 流式图为 4 个检测样本。
- 参照体系
- 有无磁性颗粒及各自采样时间。
- 研究结果
- 视网膜类器官无磁第 2/7 天约 18%/38% 阳性，磁辅助第 1/2 天约 50%/63%；内耳第 7 天由约 40% 提高至约 70%。
适用条件与研究局限
- 该部分检测荧光摄取，未在这些人源模型中完成相应靶向剪接或视功能验证。
- 独立供者层面的预测性能未测试。
来源与原文
- Magnetic‐Guided Delivery of Antisense Oligonucleotides for Targeted Transduction in Multiple Retinal Explant and Organoid Models原始研究 · Advanced Science · 2025-04-25