iPSC 心脏成纤维细胞抗纤维化筛选与心血管毒性复筛
以纤维化报告信号和细胞数量初筛，再结合心肌收缩及心肌/内皮活性复筛候选。
用途与模型
- 研究用途
- 区分抗纤维化活性与细胞损失，并排查候选药物的心血管毒性。
- 模型与细胞来源
- 2 条 ACTA2-Clover2 iPSC 心脏成纤维细胞报告系；心肌和内皮毒性复筛各采用 3 条细胞系。
- 方法版本
- 2024 年 ACTA2 报告与心肌/内皮复筛版本
- 实验形式
- 384 孔 TGFβ1 刺激与 72 小时 7 点浓度筛选；候选再作 96 孔心肌运动/活性及内皮活性检测。
材料与平台
- 报告成纤维细胞
- ACTA2-Clover2 报告的 iPSC 心脏成纤维细胞；TGFβ1 激活，吡非尼酮等作功能参照。
- 双通道成像与药物库
- 约 5000 项候选；ImageXpress 检测 Clover2 和 Hoechst，初筛 0.3125–20 μM。
- 心肌/内皮复筛
- CellTiter-Glo 测活性；SI8000 运动分析测心肌收缩速度。
测量指标与分析
- ACTA2 报告荧光
- Hoechst 细胞数量信号
- 抗纤维化 EC50
- 细胞损失 TC50
- 心肌收缩速度
- 心肌/内皮活性
并行拟合报告与细胞数量的曲线，选出报告下降而细胞数量保留的候选；结合 ADMET 计算筛选后，以心肌/内皮功能和活性再筛。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 2 条报告系的药物库筛选、20 个候选复筛及原代成纤维细胞核对。
- 测试范围
- 约 5000 个初筛药物；2 条报告系，心肌/内皮复筛各 3 条系；不同模型数分别保留。
- 参照体系
- 刺激/未刺激、吡非尼酮参照、细胞数量以及心肌/内皮毒性。
- 研究结果
- 双通道和功能复筛排除部分抑制报告但损伤细胞/收缩的候选，青蒿琥酯成为后续验证对象。
适用条件与研究局限
- 细胞数量 TC50 的筛选阈值高于初筛最高浓度，须结合原曲线与追加测量解释。
- 心肌运动和活性复筛覆盖指定浓度/时长；并未评价全面人体安全性。
- 后续三维组织、动物和靶点实验是不同验证层次。
来源与原文
- Multiscale Drug Screening for Cardiac Fibrosis Identifies MD2 as a Therapeutic Target原始研究 · Cell · 2024-10-15