H9 肾类器官的纤溶酶原损伤与阿米洛利反应
按肾小球、近端和远端小管分区，比较纤溶酶原暴露与阿米洛利处理后的损伤指标。
用途与模型
- 研究用途
- 研究蛋白尿相关纤溶酶原对人源肾结构的影响，并考察尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）抑制是否改善相应细胞表型。
- 模型与细胞来源
- H9 人胚胎干细胞分化的肾类器官；全体类器官统一接触培养液中的纤溶酶原。
- 方法版本
- 2026 年 H9、第 21 天、24 小时纤溶酶原与 uPA 抑制版本
- 实验形式
- 分化第 21 天加入 0.25 μM 人纤溶酶原，伴随或不伴随 10 μM 阿米洛利，处理 24 小时；另用 96 孔 uPA 活性测定。
材料与平台
- 类器官与处理
- H9（WiCell）肾类器官；人纤溶酶原 HPg2001；阿米洛利、匹配 DMSO 参照；无血清处理培养液。
- uPA 活性
- 外加 25 nM 活性人 uPA，清洗后加入阿米洛利梯度和 1 mM 荧光底物；各类器官以自身基线归一化。
- 分区测量
- 共聚焦切片成像、CellProfiler 分区与 Cellpose-SAM 细胞核分割；足细胞/小管标志、活化 caspase-3 和整体 qPCR。
测量指标与分析
- uPA 活性及阿米洛利 IC50
- 肾小球与小管标志荧光
- 分区细胞密度
- 活化 caspase-3
- 足细胞及小管基因表达
按肾小球相关 PDXL 阳性、近端 LTL 阳性和远端 E-cadherin 阳性区域分别统计；单个类器官对本分化批次参照归一化；qPCR 按同批次多个类器官混合样本分析。
研究设计与结果
机制研究
- 研究设计
- 0.25 μM 纤溶酶原±10 μM 阿米洛利，24 小时；与匹配溶剂参照比较；另独立 uPA 酶活抑制梯度。
- 测试范围
- uPA 测定为 3 个生物学重复、各 3 个技术重复；成像每条件至少 3 个分化重复、每重复 8–12 个类器官；qPCR 为 6 个生物学重复，每个混合 8–12 个类器官 RNA。
- 参照体系
- 纤溶酶原单用与联合阿米洛利；同批溶剂参照；3 个肾结构区域。
- 研究结果
- 阿米洛利 uPA 抑制 IC50 为 3.91 μM。纤溶酶原降低多个足细胞/近端小管标志并增加相关区域活化 caspase-3；阿米洛利改善部分标志，但凋亡指标未降低；远端标志和密度未见显著变化。
适用条件与研究局限
- 只采用 H9 这 1 个细胞背景，未比较多个供者或细胞系。
- 类器官没有功能性血管/滤过屏障，纤溶酶原统一暴露，不呈现体内由滤过进入不同区室的递送过程。
- 阿米洛利对部分转录标志改善在分化重复间差异较大；未详细比较阿米洛利单用对基线标志、密度和凋亡的影响。
- 现有结果尚未区分完整的 uPA 依赖与非依赖损伤路径。
来源与原文
- Kidney organoids as a platform to study plasminogen-induced injury and uPA-based therapies原始研究 · Stem Cells Translational Medicine · 2026-09-21