C9ORF72 患者神经元 RNA 聚集斑高内涵筛选
以 RNA 原位杂交和自动图像分析筛选聚集斑变化，再排除细胞丢失与普遍基因表达抑制。
用途与模型
- 研究用途
- ALS 病理机制、RNA 聚集斑调节及候选分子的多指标复核。
- 模型与细胞来源
- C9ORF72 重复扩增患者 iPSC 分化神经元；主筛一个模型，后续在独立患者背景复核。
- 方法版本
- 2025 年 96,200 化合物/患者神经元筛选版本
- 实验形式
- 1,536 孔主筛、RNA FISH 和自动成像；浓度反应、通用表达反筛及细胞毒性分别开展。
材料与平台
- 患者 iPSC 神经元与健康对照
- 主筛与初次验证使用同批分化模型；后续扩展至 3 位独立供者背景。
- RNA FISH、Opera/Operetta 与 Acapella/Harmony
- 核区内聚集斑计数按细胞数归一，并处理板内位置效应。
- 报告细胞与 IncuCyte
- 通用表达抑制反筛、重复相关蛋白及细胞生长为独立模型的机制复核。
测量指标与分析
- 每细胞 RNA 聚集斑
- 核/细胞数
- 浓度反应
- 通用表达抑制
- 独立报告模型的重复蛋白与细胞生长
主筛按聚集斑增减和细胞数变化选择候选，随后复测、反筛并扩展患者背景；减少聚集斑的候选另外检查相关蛋白和毒性。
研究设计与结果
机制研究
- 研究设计
- 大型单浓度主筛后进行梯度复测、通用表达反筛和患者来源复核。
- 测试范围
- 96,200 个化合物主筛；2,952 个进入复测，139 个通过特异性筛选，82 个在 3 位独立供者模型确认。
- 参照体系
- 患者溶剂条件、健康背景、不同浓度及机制参照。
- 研究结果
- 确认的候选包括增加或减少聚集斑的分子；部分剪接体调节剂减少聚集斑，同时在独立 HEK 报告模型增加重复相关蛋白与细胞毒性。
适用条件与研究局限
- 82 个为聚集斑调节候选，包含两个变化方向，治疗获益需另行验证。
- 蛋白/毒性机制使用独立报告细胞；患者神经元中的内源蛋白当时未获得可靠检测。
- 主文方法与结果对复测浓度/重复描述不同，完整复测设计需结合对应补充版本。