同供者肝类器官与 CD8 阳性 T 细胞的氟氯西林损伤评价
将经过氟氯西林激活的同供者 CD8 阳性 T 细胞加入肝类器官，用组织死亡、肝功能和免疫指标评价基因型及供者响应差异。
用途与模型
- 研究用途
- 在控制异体免疫背景后研究免疫参与的药物性肝损伤。
- 模型与细胞来源
- 人诱导多能干细胞（iPSC）衍生肝类器官、同供者单核细胞衍生树突状细胞和 CD8 阳性 T 细胞；供者按人类白细胞抗原（HLA）基因型 HLA-B*57:01 分组。
- 方法版本
- 2025 年 Gri3D 肝类器官与同供者免疫细胞版本
- 实验形式
- Gri3D 96 孔、500 μm 微腔，每腔接种 250 个前肠细胞，肝类器官培养至第 23 天；类器官先处理 72 小时，再进行 72 小时免疫共培养。
材料与平台
- 组织培养
- Gri3D 微腔；接种培养液含 2% Matrigel，后续采用不含 Matrigel 的维持培养液。
- 免疫激活与给药
- 树突状细胞激活阶段氟氯西林 1000 μM；类器官预处理为 100 μM。同供者未激活 T 细胞与无 T 细胞组提供对照。
- 组织与免疫测量
- DRAQ7 死亡细胞成像、三磷酸腺苷（ATP）发光、白蛋白与角蛋白 18、肿瘤坏死因子 α、颗粒酶 B 检测，以及 T 细胞增殖和激活标志。
测量指标与分析
- 类器官死亡细胞比例
- 白蛋白分泌
- 角蛋白 18 释放
- T 细胞增殖及激活标志
- 肿瘤坏死因子 α 与颗粒酶 B
先比较同供者与异体 T 细胞背景，再按 HLA 基因型比较药物激活，最后检验强弱响应 T 细胞与配对肝类器官的损伤关系。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 氟氯西林处理的树突状细胞激活同供者 CD8 阳性 T 细胞，随后与预先给药的同供者肝类器官共同培养；另设异体细胞、未激活 T 细胞及无 T 细胞对照。
- 测试范围
- T 细胞激活试验为 4 位 HLA-B*57:01 携带者和 4 位非携带者。共培养概述与后续携带者分组对供者数的表述不同，因此无法从这部分结果确定统一的响应比例。
- 参照体系
- 同供者与异体配对；HLA 携带者与非携带者；激活与未激活 T 细胞；有无 T 细胞。
- 研究结果
- 激活试验中 2/4 位携带者出现超过对照 2 倍的增殖。2 位强响应供者在共培养中出现约 4 倍的类器官死亡细胞信号；弱响应和非携带者未出现相同损伤。
适用条件与研究局限
- 共培养结果及图 5 的效应细胞:靶细胞比例为 5:1，方法部分写为 1:5，二者不一致。
- T 细胞流程包含初始激活、扩增及再次刺激，组织共培养在这些步骤之后进行。
- 初始组织接种仍使用 Matrigel。混合培养的 ATP 同时来自组织与 T 细胞，无法单独归于肝细胞，需结合组织死亡染色和肝细胞相关标志。
- 研究未建立患者肝损伤风险概率，亦未完成独立广泛药物集验证。
来源与原文
- Autologous Organoid‐T Cell Co‐Culture Platform for Modeling of Immune‐Mediated Drug‐Induced Liver Injury原始研究 · Advanced Science · 2025-09-26