人肾类器官的 AAV 递送与组织损伤比较
在肾类器官中同时测量病毒报告基因递送、目标编辑和组织损伤，并比较炎症信号抑制干预。
用途与模型
- 研究用途
- 评价腺相关病毒（AAV）接触后不同肾细胞区域的递送及损伤反应，研究保护性干预。
- 模型与细胞来源
- H9 人胚胎干细胞与 BJFF 人诱导多能干细胞（iPSC）衍生肾类器官；HK-2 为平行目标编辑比较。
- 方法版本
- 2025 年 AAV2/8/9 比较及 bardoxolone 同时干预版本
- 实验形式
- 第 21 天接触病毒；AAV2/8/9 荧光报告比较后，用双 AAV2 递送 Cas9 与向导 RNA。干预组第 21–28 天同时加入 bardoxolone，追踪至第 42 天。
材料与平台
- 递送与编辑
- 绿色荧光蛋白报告载体；双 AAV2 Cas9/向导 RNA 体系，目标为抗肌萎缩蛋白基因 DMD 的片段删除；目标位点 DNA 检测。
- 区域与组织检测
- 细胞标志染色、覆盖 496 基因的 1,486 条空间 RNA 探针、整体 RNA 分析、γH2AX/CDKN1A/RELA、胶原 I 与培养液白细胞介素。
- 保护性干预
- bardoxolone 同时处理，与 AAV2 单独处理和未处理类器官比较。
测量指标与分析
- 不同肾细胞区域的荧光报告阳性比例
- 目标位点编辑信号
- DNA 损伤与细胞衰老标志
- 炎症基因及培养液白细胞介素
- 胶原 I 相关纤维化面积
将报告基因递送与目标编辑分别检测，再比较空载体、编辑载体与同时干预条件下的区域表达和组织损伤。
研究设计与结果
实验条件比较
- 研究设计
- 比较 AAV2/8/9 递送；对 AAV2 开展空载体、编辑载体和 bardoxolone 干预比较。
- 测试范围
- 整体 RNA 测序为 3 个生物学重复；H9 人胚胎干细胞与 BJFF 人诱导多能干细胞为 2 种模型来源。
- 参照体系
- 未处理类器官、不同 AAV 血清型、空载体与编辑载体；HK-2 作为独立编辑比较。
- 研究结果
- AAV2 在近端与远端小管相关细胞中递送较明显，空载体和编辑载体均出现损伤。bardoxolone 减少胶原 I、炎症及衰老标志，报告基因递送比例未显著下降。
适用条件与研究局限
- 类器官未获得明确的 DMD 目标编辑证据，递送成功不能替代编辑检测。
- 病毒基因组脱壳触发损伤为候选机制，尚未直接验证。
- 浴式病毒暴露与体内给药分布不同；类器官缺少完整血管与滤过。
- 当前结果对应所测载体和干预条件，未覆盖其他血清型的损伤。
来源与原文
- AAV for gene therapy drives a nephrotoxic response via NFκB in kidney organoids原始研究 · Signal Transduction and Targeted Therapy · 2025-08-08